介紹

雞傳染性法氏囊病病毒抗體檢測試劑盒檢測雞血清中的雞傳染性法氏囊病病毒中和抗體，用于評估養(yǎng)雞場雞傳染性法氏囊病疫苗免疫產(chǎn)生的中和抗體的狀況及感染雞的血清學(xué)輔助診斷。

雞傳染性法氏囊病病毒VP2蛋白具有一個(gè)構(gòu)象依賴性（不連續(xù)）的中和抗原決定簇，研究發(fā)現(xiàn)針對這個(gè)抗原決定簇的抗體可以被動地保護(hù)雞免受雞傳染性法氏囊病病毒的感染。本試劑盒采用競爭ELISA法，在酶標(biāo)板條微孔上預(yù)包被雞傳染性法氏囊病病毒VP2蛋白，運(yùn)用抗VP2蛋白單克隆抗體與血清中的抗VP2蛋白抗體競爭固相載體中的VP2蛋白結(jié)合位點(diǎn)，從而間接檢測血清中的抗VP2蛋白抗體。在試驗(yàn)中，加入待檢血清及抗VP2蛋白的單克隆抗體，經(jīng)過溫育后，若樣品中含有雞傳染性法氏囊病病毒VP2蛋白特異性抗體，則與包被板上的抗原結(jié)合，從而阻礙了抗VP2蛋白單抗與抗原的結(jié)合，經(jīng)洗滌除去未結(jié)合的抗體和其他成分后；再加入抗小鼠酶標(biāo)二抗，與檢測板上的抗原抗體復(fù)合物發(fā)生特異性結(jié)合；再經(jīng)洗滌除去未結(jié)合的酶結(jié)合物；在微孔中加入TMB底物顯色，樣本的吸光度值與其所含有的抗VP2蛋白抗體的含量成負(fù)相關(guān)，從而達(dá)到檢測樣品中抗VP2蛋白抗體的目的。

組份

需自備的設(shè)備及試劑

1. 微量移液器： 0.5μl-10μl、10μl-100μl、100μl-1000μl。

2. 一次性移液器吸頭。

3. 量筒：500ml。

4. 96孔板酶標(biāo)儀。

5. 蒸餾水或去離子水。

6. 洗瓶或洗板機(jī)。

樣品制備

取動物全血，按常規(guī)方法制備血清，要求血清清亮，無溶血。

洗滌液的準(zhǔn)備

濃縮洗滌液使用前應(yīng)恢復(fù)至室溫，如有鹽結(jié)晶，搖動使結(jié)晶的鹽溶解，然后用蒸餾水或去離子水作10倍稀釋。稀釋好的洗滌液可在4℃存放一周左右。

抗VP2單抗工作液的準(zhǔn)備（現(xiàn)配現(xiàn)用）

先計(jì)算好單抗工作液的用量，再將101倍濃縮的抗VP2單抗按1：101的體積比用單抗稀釋液稀釋（例如：900μl單抗稀釋液中加9μl濃縮的抗VP2單抗，可以滿足10個(gè)微孔的用量；每次稀釋時(shí)應(yīng)多稀釋100μl，以避免加樣時(shí)的損耗而造成液體量不足）。

注意事項(xiàng)

1. 試劑盒使用前各試劑應(yīng)平衡至室溫，使用前應(yīng)搖勻，使用后放回2-8℃。

2. 不同品種、不同批號試劑盒的試劑組分不得混用，使用試劑時(shí)應(yīng)防止試劑污染。

3. 顯色液和終止液對皮膚和眼可能有刺激性，使用時(shí)應(yīng)該注意防護(hù)。

4. 顯色液不要暴露于強(qiáng)光和避免接觸氧化劑。

5. 檢測板拆封后應(yīng)避免受潮或沾水(未用完的抗原包被板加干燥劑放于自封袋中，并盡快置于2-8℃)。

6. 所有廢棄物在丟棄之前應(yīng)合理處理以免污染。

7. 嚴(yán)格遵守操作說明可以獲得最好的結(jié)果。操作過程中移液、定時(shí)和洗滌等的全部過程必須精確。

操作步驟

1. 取預(yù)包被的檢測板（根據(jù)樣品多少，可拆開分次使用），加入待檢血清10μl到檢測板孔底，同時(shí)設(shè)陰性2孔和陽性對照1孔，取陰性及陽性對照各10μl分別加入反應(yīng)孔中，立即加入90μl單抗工作液。輕輕振勻孔中樣品（勿溢出）。

2. 蓋上封板膜，置37℃溫育30分鐘。

3. 小心揭開封板膜，甩掉板孔中的溶液，用洗滌液洗5次。每次用洗滌液注滿板孔（約250μl）。洗滌5次后在干凈吸水紙上拍干。

4. 每孔加酶結(jié)合物100μl，蓋上封板膜，置37℃溫育30分鐘。

5. 小心揭開封板膜，甩掉板孔中的溶液，洗滌5次, 方法同2。切記最后在干凈吸水紙上拍干。

6. 每孔顯色液100ul，蓋上封板膜37℃閉光顯色10分鐘。

7. 每孔加終止液50μl，使反應(yīng)終止，10分鐘內(nèi)測定結(jié)果。

結(jié)果判定

用酶標(biāo)儀于450nm（630nm作參比波長）讀取吸光度OD值。

試驗(yàn)成立的條件是：

陰性對照（N）OD值>0.5；

陽性對照（P）S/N值<0.4。

計(jì)算方法：

樣品OD值/陰性對照OD均值=S/N值。

陰陽性判斷：

S/N值≥0.5則判斷為陰性；

S/N值<0.5則判斷為陽性。

貯存方法： 2 - 8oC下貯存。

有效期： 12個(gè)月。